如何使用膠體金層析法快速檢測乳制品中的三聚氰胺

很多時候,第三方檢測機構在對乳制品中的三聚氰胺檢測時,會采用大型專業檢測儀器設備。這些設備通常采購費用較為昂貴,操作復雜。所以膠體金層析法以其快速、準確、方便、操作簡單等優點,成為很多乳制品三聚氰胺的首選檢測方法。

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如何使用膠體金層析法快速檢測乳制品中的三聚氰胺綜述

很多時候,第三方檢測機構在對乳制品中的三聚氰胺檢測時,會采用大型專業檢測儀器設備。這些設備通常采購費用較為昂貴,操作復雜。所以膠體金層析法以其快速、準確、方便、操作簡單等優點,成為很多乳制品三聚氰胺的首選檢測方法。將膠體金免疫標記技術與層析技術結合起來的一種新型固相標記測定技術。目前主要通過膠體金免疫層析試紙來進行檢測。

膠體金層析法

三聚氯胺抗原制備

三聚氯胺屬于小分子化合物,其本身并沒有免疫原性,所以我們需要先對三聚氯胺分子進行修飾,制備出與其結構類似的聚氯胺半抗原,即進行抗原設計。通過半抗原可制備免疫抗原和包被抗原。然后將制備出的免疫抗原注射入小鼠體內,經過一定時間,從體內提取,經過分離提純后可得到三聚氰胺單克隆抗體,目前市面上已有針對不同物質的單克隆抗體,也可直接購買。

抗原制備

膠體金及金標抗體制備

采用氯金酸還原法制備膠體金,常用的還原劑為檸檬酸三鈉。制備得到的膠體金需用紫外分光光度法和電鏡鑒定其粒徑,確定達到要求。將制備的膠體金溶液調節pH后,加入己經提純過的王聚氯胺單克隆抗體,并添加封閉劑,經離心、沉淀、混懸等步驟最終制得金標抗體。

檢測比較

試紙組裝方法

將硝酸纖維素膜(簡稱NC膜)或玻璃纖維素膜包裹PVC底板,并組裝濾紙和吸水墊,使用??诘狞c膜噴金設備將制備的包被抗原和購買所得羊抗鼠二抗,分別噴涂在NC膜檢測線和質控線位置上,金標抗體加入到金標墊上,粘貼上樣品墊即可得到試紙。試紙的檢測方法如下圖

 

參考圖

T線和C線均顯色明顯為陰性,記為“-”。說明試樣中待測物濃度小于試紙檢出限;當T線顏色變淡為弱陽性,記為“-/+”。說明試樣中待測物濃度約等于試紙檢出限;當T線徹底消失為強陽性,記為"+",說明試樣中待測物濃度高于試紙檢出限。當C線不顯色時,說明試紙失效,需更換試紙重新檢測。

 

 

 

 

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