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花青素檢測項目及檢測標準介紹_拜恩檢測-專業第三方檢測機構

發表時間:2018-06-15   來源:

        花青素作為一種天然食用色素,安全、無毒、資源豐富,而且具有一定營養和藥理作用,在食品、化妝品、醫藥等方面有著巨大的應用潛力。

         自然界有超過300種不同的花青素。他們來源于不同種水果和蔬菜如紫甘薯、越橘、酸果蔓、黑枸杞、藍莓、葡萄、接骨木紅、黑加侖、紫胡蘿卜和紅甘藍、顏色從紅到藍。這些花青素主要包含飛燕草素(Delchindin)、矢車菊素(Cyanidin)、牽?;ㄉ兀≒etunidin)、芍藥花色素(Peonidin)。

花青素圖1

1范圍

  本標準規定了植物源性食品中的飛燕草色素、矢車菊色素、矮牽牛色素、天竺葵色素、芍藥素和錦葵 色素共6種花青素的高效液相色譜測定方法。

  本標準適用于植物源性食品中花青素含量的測定。

  本標準的檢出限:以稱樣量為1 g,定容體積為50 mL計,飛燕草色素、矢車菊色素、天竺奏色素、芍 藥素和錦葵色素5種花青素的檢出限均為0. 15 mg/kg;矮牽牛色素的檢出限為0. 5 mg/kg。同樣條件 下定量限:飛燕草色素、矢車菊色素、天竺葵色素、芍藥素和錦葵色素5種花青素均為0. 5 mg/kg;矮牽 牛色素為1.5 mg/kg。

  2規范性引用文件

  下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

  GB/T 6379. 1測量方法與結果的準確度(正確度與精密度)第1部分:總則與定義 GB/T 6379. 2測量方法與結果的準確度(正確度與精密度)第2部分:確定標準測量方法重復 性與再現性的基本方法

  GB/T 6682分析實驗室用水規格和試驗方法

  3原理

  植物源性食品中的花青素主要以花色苷的形式存在。試樣經乙醇一水的強酸溶液超聲提取花色苷后,經沸水浴將花色苷水解成花青素,用高效液相色譜法測定,以保留時間定性,外標法定量。

  4試劑和材料

  除非另有規定,僅使用分析純試劑。水為GB/T 6682規定的一級水。

  4.1無水乙醇(C2H5OH):色譜純。

  4.2甲酸(CH2Oz):色譜純。

  4.3甲醇(CH3OH):色譜純。

  4.4鹽酸(HCl):優級純。

  4.5提取液:無水乙醇+水+鹽酸=2+l + l(V+V+V),取200 mL無水乙醇、lOOmL水和lOOmL 鹽酸混勻。

  4.6 10%鹽酸甲醇溶液(體積比):取10 mL鹽酸、90 mL甲醇混勻。

  4.7 飛燕草色素(Delphinidin) : CAS 號 528 - 53 - 0,純度≥96 %。

  4. 8 矢車菊色素(Cyanidin) : CAS 號 528 - 58 - 5,純度≥98 %。

  4.9 矮牽牛色素(Petunidin chloride) :CAS 號 1429 - 30 - 7,純度≥96%。

  4.10天竺葵色素(Petunidin):CAS號134-04- 3,純度≥96%。

  4. 11 芍藥素(Peonidin) :CAS號 134-01-0,純度≥98%。

  4. 12 錦葵色素(Malvidin) :CAS 號 643 - 84 - 5,純度≥96%。

  4.13單標儲備溶液

  分別準確稱取飛燕草色素(Delphimdin)、矢車菊色素(Cyanidin)、矮牽牛色素(Petunidin chloride)、 天竺葵色素(Pelargomdin)、芍藥素(Peonidm)和錦葵色素(Malvidin)共6種花青素標準品5. 0 mg,用 10%鹽酸甲醇溶液(4. 6)溶解并分別定容至10 mL容量瓶中,即為500 mg/ L的單標儲備液,于 -18°C 下,貯存于密閉的棕色玻璃瓶中,保存有效期為6個月。

  4.14 混合標準使用液

  在使用中將單一標準儲備液進行混合后,用10%鹽酸甲醇溶液(4. 6)作為溶劑,并逐級稀釋成 0.5mg/L、l. 0 mg/L、5. 0 mg/L、25. 0 mg/L、50. 0 mg/L或其他濃度的花青素混合標準使用液。在4℃條 件下,有效期為6個月。

  4.15 濾膜:0.45 μm,水相濾膜。

  5 儀器與設備

  5.1高效液相色譜儀帶

  紫外或二極管陣列檢測器。

  5.2 天平:精度 0.01mg,0.01g。

  5.3 水浴鍋:精度±2℃。

  5.4 勻漿機。

  5.5 超聲波清洗機。

  5.6 粉碎機。

  6 分析步驟

  6.1 試樣制備

  采用四分法分取樣品,含水率高的樣品,如葡萄、茄子等,取約200 g于勻漿機中勻漿;含水率低的樣品,如黑米、黑豆等,用粉碎機進行粉碎,過250 的篩。所有樣品在 -18°C條件下保存。

  6.2提取

  根據樣品中花青素含量,稱取樣品1.00g?10.00g于50 mL具塞比色管中,加人提取液(4. 5)定容至刻度,搖勻1 min后,超聲提取30 min。

  6.3水解

  超聲提取后,于沸水浴中水解1 h,取出冷卻后,用提取液a 5)再次定容。靜置,取上清液,用0. 45 水相濾膜過濾,待測。樣品制備好后,在4°C條件下,保存時間不超過3 d。

  6.4測定

  6.4.1 色譜參考條件

  a) 色譜柱:C18柱,250 mm × 4. 6 mm × 5 μm或性能相當者;

  b) 流動相A為含1 %甲酸水溶液,流動相B為含1%甲酸乙腈溶液;

  c) 檢測波長:530 nm;

  d) 柱溫:35°C;

  e) 進樣量:20 μL;

  f) 梯度洗脫條件,見表1。

 

時間,min 流速,mL/min 流動相A,% 流動相B,%
0. 0 0.8 92. 0 8. 0
2. 0 0. 8 88. 0 12. 0
5. 0 0.8 82 18
10. 0 0.8 80. 0 20. 0
12 0.8 75. 0 25. 0
15 0.8 70 30
18 0.8 55 45
20. 0 0.8 20 80
22 0.8 92. 0 8. 0
30 0.8 92 8. 0

 

  6.4.2色譜分析

  分別將標準溶液和試樣溶液,注人液相色譜儀中,以保留時間定性,以樣品溶液峰面積與標準溶液峰面積比較定量。色譜圖參見附錄A。

  7 結果計算

  樣品中花青素含量為6種花青素含量之和。其含量以質量分數w計,單位為毫克每千克(mg/ kg),按式⑴計算。

  8 精密度

  本標準精密度數據是按照GB/T 6379.1和GB/T 6耵9. 2的規定確定的,獲得重復性和再現性的值是以95%的置信度來計算。本標準方法的精密度數據參見附錄B。

  附錄A

  (資料性附錄)

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