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沒毛病,a-氨基酸就得這么檢測_拜恩檢測-專業第三方檢測機構

發表時間:2019-08-22   來源:

a-氨基酸不僅是蛋白質的最重要的組成成分,也是生物體中最重要的氨基酸,今天我們就a-氨基酸的檢測方法-非水滴定法,詳細的為大家介紹一下。非水滴定法主要就是針對α-氨基酸的氨基進行測定,當然也可以針對羧基來測定,如在二甲基甲酰胺等堿性溶劑中,以甲醇鉀或季胺堿RNOH)等標準溶液來滴定,指示劑可選百里酚藍,終點顏色由黃變藍。

 

氨基酸

 

一、α-氨基酸檢測原理

α-氨基酸的α位碳原子上連有氨基和羧基,故為兩性物質,但在水溶液里兩者離解趨勢很小,溶液酸堿性均不明顯(如氨基乙酸的羧基電離H+的Ka=2.5×10-10,氨基接收H+的Kb=2.2×10-12),故在水溶液中無法進行準確的滴定。但在非水介質中有可能被準確滴定。如在冰醋酸體系中,用HClO4的HAc溶液作滴定劑,結晶紫作指示劑,可準確滴定α-氨基酸。滴定后生成物為呈酸性的α-氨基酸的高氯酸鹽。結晶紫在強酸性介質中為黃色,pH=2左右為藍色,pH>3時為紫色,因而在此強酸滴定弱堿的反應中,一般選由紫色變為穩定的藍綠色或藍色為終點,若溶液呈現綠色或黃色則滴定過量,在確定終點時,可用電位計作參比。

 

若試樣難溶于冰醋酸,可加入一定量甲酸作助溶劑,也可加入過量HClO4-冰醋酸,待樣品溶解完全后用NaAc-冰醋酸返滴過量的HClO4。HClO4-冰醋酸滴定劑常用鄰苯二甲酸氫鉀作基準物質進行標定,反應為:

在標定中KClO4有可能被析出,但不影響標定結果

 

二、α-氨基酸檢測儀器和試劑

1.儀器:3.000mL微型滴定管,50mL容量瓶,20mL錐形瓶,干燥小燒杯。

2.試劑:

(1)HClO4-冰醋酸(0.1mol/L):在低于25℃的250mL冰醋酸中緩慢邊攪拌邊加入2mL原裝(70%~72%)HClO4,混勻后小心加入4mL乙酸酐,攪拌均勻,冷至室溫,放置過夜使水分與乙酸酐反應完全。

(2)鄰苯二甲酸氫鉀基準物質:在105~110℃條件下干燥2h,在干燥器中用廣口瓶保存備用。

(3)結晶紫(2g·L-1)冰醋酸溶液

(4)冰醋酸(A.R)

(5)乙酸酐(A.R)

(6)甲酸(A.R)

(7)α-氨基酸試樣

 

三、α-氨基酸檢測實驗步驟

1.HClO4冰醋酸滴定劑的標定

準確稱取0.5g左右KHC8H4O4于小燒杯中,加入30mL冰醋酸,溶解后定量轉移至50mL容量瓶內,用冰醋酸稀釋至刻度,搖勻。移取2mL于錐形瓶內,加1滴結晶紫指示劑,用HClO4-冰醋酸滴定至紫色轉變為藍綠色,即為終點,平行測定3~5份,各次相對偏差應≤±0.2%。

 

2.α-氨基酸含量測定

準確稱取0.2g試樣于小燒杯中,加入30mL冰醋酸、2mL乙酸酐與4mL甲酸,攪拌,若溶解度不高則可適量多加甲酸,待試樣溶解后定量轉移至50mL容量瓶中,用冰醋酸稀釋至刻度,搖勻。移取5mL試液,加1滴結晶紫指示劑,用HClO4-冰醋酸滴至藍綠色,即為終點,平行測定三次,計算α氨基酸的質量分數。

 

四、α-氨基酸檢測注意事項

1.冰醋酸中的pH值定義與水中相同,但具體數值有區別,指示劑變色范圍在HAc中與在水中有區別。 

2.乙酸酐可與水反應生成乙酸,脫去試液中的水分。

3.在非水體系中,甲基紫和結晶紫變化狀態相同,可以用甲基紫代替結晶紫作指示劑。

4.冰醋酸在低于15℃時會凝固結冰,而液態冰醋酸體積受溫度影響較大,故本實驗適宜在天氣較暖的春、秋季或有空調的房間內進行。

5.α-氨基酸可選乙氨酸(式量75.07)、丙氨酸(89.09)、谷氨酸(147.13)、異白氨酸(131.13)等易溶于冰醋酸的氨基酸。

6.在非水滴定中儀器必須干燥,否則會影響測定結果。

 

 

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